机械网--蛋白质提取与纯化技术
选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已成为现代生物学发展的主要方向钉子户被强拆后土地可以卖吗,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作触及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。1是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;2是将混合物置于单1物相中,通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而到达分离目的,如电泳,超速离心,超滤等。在所有这些方法的利用中必须注意保存生物大分子的完全性,避免酸、硷、高温,剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备1般分为以下4个阶段:选择材料和预处理,细胞的破碎及细胞器的分离,提取和纯化,浓细、干燥和保存。微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料,所选用的材料主要根据实验目的来肯定。对微生物,应注意它的生长时间,在微生物的对数生长时间,酶和核酸的含量较高,可以获得高产量,以微生物为材料时有两种情况:(1)得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等;(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等。植物材料必须经过去壳违章建筑能强拆的标准,脱脂并注意植物品种和生长发育状态不同,其中所含生物大分子的量变化很大,另外与季节性关系密切。对动物组织为什么有强制拆迁这问题,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理。另外,对预处理好的材料,若不立即进行实验,应冷冻保存,对易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备。蛋白质的分离纯化 1,蛋白质(包括酶)的提取大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中,因些,可采取不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。(1)水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常常使用的溶剂,通常常使用量是原材料体积的1⑸倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。1方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间。但另外1方面,温度升高会使蛋白质变性失活,因此,基于这1点考虑提取蛋白质和酶时1般采取低温(5度以下)操作。为了不蛋白质提以进程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制剂(如2异丙基氟磷酸,碘乙酸等)。下面侧重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。1、pH值蛋白质,酶是具有等电点的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH 范围内。用稀酸或稀碱提取时,应避免过酸或过碱而引发蛋白质可解离基团产生变化,从而导致蛋白质构象的不可逆变化,1般来说,碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。2、盐浓度稀浓度可促进蛋白质的溶,称为盐溶作用。同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合,具有保护蛋白质不容易变性的优点,因此在提取液中加入少量NaCl资讯分类行业动态帮助文档展会专题报道5金人物商家文章
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